8月31日，国际顶级学术期刊《自然》刊登了由上海邦耀生物科技有限公司（以下简称“邦耀生物”）与华东师范大学、浙江大学医学院附属第一医院合作的非病毒定点整合CAR-T技术（Quikin CART®）研究成果。

研究人员在不使用病毒载体的情况下，通过一步制备获得基因组定点整合的CAR-T细胞产品。在临床试验中，该产品体现了出色的临床安全性和有效性，首例接受治疗的患者至今已疾病完全缓解（CR）超过2年。

传统CAR-T产品的制备主要通过病毒载体来实现，但这一方式会面临多个挑战：比如，由于病毒采用随机插入的方式将CAR序列整合到细胞基因组中，可能会改变正常基因的表达，因此存在潜在的致瘤风险，而且这种方式制备获得的CAR-T产品均一性较低；另外，传统CAR-T产品的制备时间都比较长，增加了患者等待用药的时间，也意味着这样的CAR-T产品无法用于肿瘤进展非常快的患者；CAR-T疗法的生产成本也限制了它的普及范围。

Quikin CART®可以有效解决使用病毒载体和随机插入带来的几大难题。定点整合可以让每个CAR序列都精确地插入到基因组的特定位点，能避免随机插入导致的致瘤风险，最大程度保证了CAR-T产品的安全性和有效性。只需一步制备，即可同时实现CAR的持续性表达和T细胞内源基因的调控，大大缩短了整个CAR-T产品的制备时间，减少了生产成本，得以让更多患者受益。

在这项研究中，邦耀生物团队利用Quikin CART®平台将表达靶向CD19的CAR序列精确整合到T细胞基因组的PD1基因位点，在表达CAR的同时下调PD-1免疫检查点的蛋白表达，即BRL-201的CAR-T细胞疗法。在临床前研究中，相比于慢病毒感染和结合基因编辑技术敲除PD1的CAR-T细胞，BRL-201无论在PD-L1高表达还是低表达的肿瘤细胞中，都显现出更强、更持久的杀伤效果，小鼠生存率得到显著提高。

在开展的BRL-201治疗复发难治性非霍奇金淋巴瘤临床试验中，在接受治疗的8例患者中，未观察到CAR-T相关的神经毒性和2级以上细胞因子风暴，证明了BRL-201具有出色的临床安全性。检测结果显示CAR-T细胞回输后能在患者体内快速扩增并持续较长时间，接受治疗后87.5%的患者获得了完全缓解的效果，所有患者均对治疗响应，客观缓解率（ORR）为100%。迄今，接受该CAR-T疗法的患者无癌生存期最长已超过2年，目前仍处于疾病完全缓解的状态。值得一提的是，无论是针对PD-L1高表达肿瘤患者的治疗，还是在CAR-T细胞回输剂量和阳性率较低的条件下，BRL-201均显示出了良好的疗效，证明了其具有强大的肿瘤杀伤能力。

对于这项突破性研究的意义与前景，论文共同通讯作者，邦耀生物创始人、董事长刘明耀教授表示：“2年过去了，患者体内没有癌细胞，并且CAR-T细胞仍然在巡逻和监测淋巴瘤，给患者带来了持久的收益。这些持久的结果是一项里程碑式的科学成就。虽然治疗复发难治性淋巴瘤的CAR-T产品已经上市，但CAR-T疗法还有待更大的突破。Quikin CART®技术在不使用病毒的情况下，一步实现CAR元件在基因组的定点整合和T细胞内源基因的调控干预，极大降低了CAR-T细胞的生产成本，缩短了CAR-T细胞的制备时间，让CAR-T细胞更安全，更强大有效，得以让更多患者受益。”

Quikin CART®技术发明人，该论文第一作者、共同通讯作者，邦耀生物研发副总裁、华东师范大学生命科学学院副研究员张楫钦博士说：“近年来，CRISPR/Cas9基因编辑技术的不断成熟和发展让我们萌生了将其应用于CAR-T治疗的想法。通过对现有CAR-T技术的深入剖析以及对目前CAR-T治疗领域存在问题的系统梳理，我们意识到利用基因编辑技术来制备非病毒定点整合CAR-T细胞是一个具有巨大潜力的发展方向。我们通过大量的方法摸索和条件优化，建立了成熟的Quikin CART®技术平台。Quikin CART®技术可以在不使用病毒载体的情况下，通过一步制备同时实现CAR稳定表达和内源基因调控，能使CAR-T细胞的改造更加精准化，也因此具备了现有其他CAR-T技术所没有的诸多优点。我们有望利用这一全新一代的CAR-T技术，开发出更多成功有效的CAR-T产品，来造福更多的患者。同时，随着近年来基因编辑等新兴生物技术的发展，相信今后会有更多先进、强大的技术平台被陆续开发出来，我们在技术迭代上也会努力做出更多突破性的工作，以期为疾病的临床治疗带来更多的希望。”

参考资料：
[1] Zhang et al., (2022). Non-viral, specifically targeted CAR-T cells achieve high safety and efficacy in B-NHLa. Nature, https://doi.org/10.1038/s41586-022-05140-y