4月15日，世界卫生组织（WHO）正式定稿了《生物分析方法验证及样品分析  》（Guideline on bioanalytical method validation and study sample analysis），该指南在架构和主要内容上与ICH发布于2022年5月的同名指南M10  《生物分析方法验证及样品分析》高度相似，但在细节上进行了一些补充和完善，为制药行业的生物分析工作提供了更为详尽的指导。

与M10一样，指南适用于支持监管决策的生物分析方法验证和研究样品分析，包括非临床毒代动力学研究、非临床药代动力学研究以及临床试验的所有阶段（包括生物利用度/生物等效性研究），适用于配体结合分析（LBA）和色谱法（如液相色谱或气相色谱）的定量分析。它还强调了在动物实验中遵循3R原则（替代、减少、优化）的重要性。但指南不适用于生物标志物分析和免疫原性评估的生物分析方法。

相对ICH M10，WHO指南的主要补充内容简要罗列如下，识林会员可结合两份指南的花脸稿做进一步解读：

• 交叉验证。指南明确指出，交叉验证的目的在于定义数据之间的关系，而非简单地判断数据是否可比。即使偏差较小，也建议对数据集之间的观察偏差进行校正。

• 样品分析中的残留评估。指南新增了对研究样品分析中残留影响的评估和报告要求。如果研究样品中有大量浓度高于定量上限（ULOQ）的样本，建议通过稀释质量控制（dilution QC samples）样本来调查残留情况。一旦发现残留，应采取措施减轻其对测量浓度的影响，例如通过非随机化样本顺序或在高浓度样本后注入空白样本。此外，还需在生物分析报告中对报告浓度的有效性进行说明。

• 高浓度QC样本的稳定性。指南强调，对于新增的高浓度QC样本，应对其稳定性进行研究。此外，建议在稳定性研究中纳入稀释QC样本（高于ULOQ水平），与高浓度QC样本和低浓度QC样本一起进行评估。这一补充有助于更全面地评估生物分析方法在高浓度范围内的稳定性和可靠性，确保在实际应用中能够准确测量高浓度样本。

• 校准曲线参数和QC样本的准确性与精密度。指南要求报告校准曲线参数，并呈现校准标准品的反算浓度，以及所有接受运行的平均准确性和精密度值。此外，即使在方法验证中已经验证了稀释因子，也应重新评估。

• 样品分析条件的一致性。指南指出，如果在验证过程中使用了新制备的校准标准品，则在研究样品分析时应采用相同的条件。

• QC样本的稳定性评估。指南建议在制备后（时间零点）测量QC样本的浓度，仅用于确认QC样本是否正确制备。此外，对于每个分析物，无论其结构如何，以及每个基质和物种，都应独立评估其稳定性。

• QC样本的浓度范围。指南新增了对QC样本浓度范围的要求。如果需要在对数尺度中间位置（即几何平均值）设置一个中等浓度的QC样本，则可以使用额外的中等浓度QC样本，但不应省略校准曲线范围30%-50%处的中等浓度QC样本。

• 代谢物的特异性评估。WHO指南指出，如果所有代谢物均已知，且分析物与代谢物共洗脱，则无需通过实验数据证明不存在反转化。然而，如果分析物和代谢物共洗脱，则特异性应通过实验进行评估。

• 样本选择性。指南强调，如果在某些样本（例如乳糜血或溶血样本）中未表现出选择性，则生物分析方法将不适用于这些类型的样本。建议进行额外的实验，如部分验证，以解决样本分析过程中如何避免这种限制的问题。