前言

2020年12月3日，强生旗下杨森公司宣布已经向FDA提交了amivantamab(EGFR/c-Met双抗)的上市申请，用于治疗铂类化疗后进展的EGFR外显子20插入突变的转移性非小细胞肺癌(NSCLC)患者，并于2021年5月获批上市。

2022年1月14日强生宣布，向美国食品和药物管理局(FDA)提交了Teclistamab(JNJ-64007957，JNJ-7957， BCMA/CD3双特异抗体)的生物制品许可申请(BLA)，用于治疗复发或难治性(R/R)多发性骨髓瘤(MM)；2022年4月14日，艾伯维公布CD3/CD20双抗Epcoritamab治疗复发性/难治性大B细胞淋巴瘤(LBCL)的1/2期临床最新数据，并宣布将依据这些数据递交上市申请。

这三个双特异抗体有两个共同点：1）都是凭借Ⅰ期临床数据申报上市；2）三个双特异抗体都出自于Genmab的Duobody双特异抗体平台。本篇文章我们来详细了解一下Genmab的双抗平台有何魔力能让这些双抗凭借Ⅰ期临床结果申报上市。

DuoBody的设计灵感主要来自于IgG4型抗体，在人体内，IgG4约占5%，其可以在体内动态的进行重链交换，又称Fab臂交换，可导致形成半抗体分子或者两个半抗体分子进一步形成双特异性抗体。

研究表明在Fab臂交换中，铰链区228位的丝氨酸（S228）以及Fc区409位的精氨酸（R409）对于Fab臂交换中起关键作用。R409残基会降低Fc与Fc之间的相互作用，因此其它亚型的抗体R409的突变促使抗体具有Fab臂交换的能力；

而为了降低抗体Fab臂交换过程中形成同源二聚体，Genemab筛选了不同抗体突变配对，研究结果发现，对于IgG1型抗体K409R 和F405L突变可以使双特异抗体的纯度达到95%以上。

在抗体的生产方面，目前主流是生产方式是在一个宿主细胞表达两个抗体的四条链，从而实现在一个宿主细胞中表达双特异抗体，这种方法相对来说比较简单，节省成本。而Genmab的双特异抗体是在两个宿主细胞中分别表达两个抗体，分别纯化两种抗体后，在体外进行还原和非还原缓冲液的切换，从而促使抗体配对形成双特异抗体。该生产过程相当于构建两个表达单克隆抗体的宿主细胞，因此成本相对来说较高。但是该缺点也造就了DuoBody双抗平台的优点--易于在体外实现高通量筛选。

在体外的组装效率方面，Genmab发表的相关文章表明，该双特异抗体平台无论是在小体积，低浓度的样品，还是高浓度大体积的生产中都具有较高的组装效率。

基于Duobody平台的双特异抗体筛选

常规双特异抗体筛选方式如下图所示，研究者一般会基于当前研究的认知及基于对目标抗体的设计，首先会分别筛选针对两种不同抗原的单克隆抗体（两个单抗同时需要具有较好的可开发性），然后将得到的两个抗体进行组装形成双特异抗体，该双特异抗体虽然在单方面具有很好的活性，但是在双抗上未必会有最好的药效。

为了提高双抗的筛选效率并得到最好的双特异抗体，有些公司会分别筛选多个不同的候选单抗，然后将这些双抗进行配对进行活性，药效等功能筛选。但是该方法工作量大，耗时长，筛选通量相对较低。

而Genmab根据Duobody的特点，在筛选过程中，其会筛选多个分别针对两个不同靶点的单抗并表达生产。而后在体外可以进行相互配对并进行双特异抗体组装，如其针对A靶点筛选10个不同特性（亲和力，表位，药效等）的候选单抗，针对B靶点筛选10个不同特点的候选单抗，最终在体外组装后可以形成10X10=100种不同的双抗，在此基础上筛选到药效最优双抗的几率会大大提升。

以已经获批上市的amivantamab（EGFR/c-Met）的筛选为例，研究者在筛选中首先获得了5个针对MET的单抗和8个针对EGFR的单抗，然后抗体在体外组成成40个不同的双特异抗体，因为这些单抗具有不同的结合能力，不同的结合表位，所以组装的双特异抗体具有不同的特性，然后根据现有知识的理解以及功能需要进行层层筛选最终得到目标的抗体。

高通量分析平台

除了高通量的抗体筛选平台，Genmab同时也构建了高通量的抗体MS质量分析平台，该平台可以快速高效的检测双特异抗体是否正确的组装，为后续相关功能研究进行质量把控。

双特异抗体的筛选相对比较复杂，其并不是两个亲和力最高或者活性最强的单抗的简单组合。双抗的疗效与两个抗体的结合表位，相对结合能力，相对价数，双特异抗体的结构等都具有相关性。Duobody双抗平台虽然在生产表达上不如其它双特异抗体平台方便、高效，但是其在临床前相关研究方面却有着其它双抗平台不具有的优点—容易实现高通量，无差别筛选，因此，其理论上有更大的几率筛选到疗效最优的双特异抗体。

当然，Genmab双抗的成功不能仅归功于其Duobody双特异抗体平台，平台只是一方面，研究者对肿瘤的深刻认识，基于功能的筛选策略，抗体后续临床策略如入组病人的筛选，给药方式探索等也是成功的关键。

参考：公司官网