制药用水是药品生产过程中重要的原辅材料，在新版GMP的指导下保证用水质量、保证产品质量。制药用水需要做哪些项目的检测？需要注意什么问题？如何验证？跟小析姐一起来看看吧。

制药用水所检项目有哪些？

制药用水根据不同的使用范围分为饮用水、纯化水、注射用水和灭菌注射用水。这里我们只针对纯化水（PW）和注射用水（WFI）进行分析讨论。
根据中国药典规定，PW需检验项目为：性状、酸碱度、氨、硝酸盐、亚硝酸盐、电导率、总有机碳（TOC）、不挥发物、重金属、微生物限度。
WFI所需检验项目与PW相比，将酸碱度更换为pH值，增加了细菌内毒素控制，其余检验项目与PW基本相同，但是微生物的控制标准要严于PW的标准。

微生物限度检测方法的确认

根据非无菌产品微生物限度检测方法的要求，应进行培养基适用性检查和计数方法适用性试验。纯化水培养基适用性检查方面，相应进行R2A琼脂培养基的适用性检查，菌株为铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌。以及无菌培养试验。

方法：取不大于100cfu菌液，于购买的R2A琼脂培养基，快速涂布，每一菌株平行2个平板。同样操作涂布与中检院购买的对照培养基，培养5天。

无菌培养试验：取2平皿，作为阴性对照培养。
标准：被测培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数比值应在0.5-2之间，菌落形态、大小一致。
无菌培养，培养基上无微生物生长。

纯化水计数方法适用性方面，水作为无抑菌作用的溶剂，进行微生物回收试验意义不大，因此，应不进行计数方法适用性试验。R2A培养基，营养欠丰富，有利于损伤微生物的回收，培养时间不低于5天。

准备工作注意哪些？

（1）仪器设备及耗材：
检测前要根据所要检测的项目，检查所用仪器/设备（如天平、pH计、电导率仪、培养箱等）是否经过了校准，是否在校准效期内，有些仪器还需要使用前校准或日校，比如天平，pH计。

微生物限度检验所用的生物安全柜（或超净工作台）、微生物过滤系统和培养箱应保证在确认效期内。用到的关键耗材，如微孔滤膜及滤杯等物料应保证其无菌性，可购买一次性无菌过滤器，也可在经验证的灭菌程序下灭菌，并在经验证的有效期内使用，但微孔滤膜不建议用户自行湿热灭菌，因为湿热灭菌可能会引起滤膜孔径的改变，除非有充分的证据证明灭菌后的滤膜仍满足使用需求。这些的确认合格与否，将直接关系到检验结果的准确性。

细菌内毒素的检验可以在超净工作台内进行，也可以在普通试验台上进行试验操作，但仍需注意操作环境的洁净状况，操作房间应保持较好的卫生状况，避免环境对测试结果的影响。

（2）试剂试液
检查要检测项目所用到的试剂是否在有效期内。
pH计校准所用标准缓冲液是否合适，一般定点用的缓冲液与所测样品的pH值接近，样品的pH值要在定点和调斜率的缓冲液pH值范围内。pH缓冲液的温度应在25℃±2℃范围内。

检测微生物限度所用的培养基为R2A琼脂培养基，配制时应使用在有效期及开瓶有效期内的干粉培养基，培养基应进行培养基适用性检查，中国药典规定，如培养基配制过程已经过验证，则可以只针对每批干粉培养基进行适用性检查，EP和USP则要求须对每个配制批进行检查。

检测细菌内毒素所用鲎试剂和内毒素标准品是否在效期内，凝胶法鲎试剂应进行灵敏度复核试验，光度法用鲎试剂应进行标准曲线的可靠性试验。

影响电导率结果的因素？

影响电导率测定结果的因素有样品的温度和可溶性气体（如空气中的CO2）。
将取样容器取满，密封，应在尽量短的时间内进行测定，能够减少可溶性气体对测定结果的影响。

测定TOC时的注意事项？

TOC测定时，应避免有机物和CO2对测定结果的影响。
取样时应采用密闭玻璃容器，容器顶空应尽量小，取样后，应立即测试，以减少塞子和容器对测定结果的影响。

测定需比色的检验项目时的注意事项

在测定硝酸盐、亚硝酸盐、重金属和氨时，均采用比色法，需要注意遵守平行原则，须采用同套的比色管，对比时所有比色管中液体应体积相同。观察方式有两种，一种是在白色背景上自上而下透视，适于色泽较浅时采用，另一种是在白色背景前平视观察，适于色泽较深时采用。同时检验人员不应有色弱或色盲等。

微生物限度检查时注意事项？

人员应经过培训且考核合格，应具备微生物的基础知识和洁净室的行为规范。进入洁净区前后应检查洁净区内压差及温湿度是否在规定范围内；准备所需物品和样品经消毒剂擦拭消毒后，放入传递窗对表面进行紫外消毒，紫外消毒只能作为辅助手段，而不能完全代替化学消毒剂，紫外消毒时应注意避免对样品的影响。

检验时，最好将检验所用物品器具和样品一次性全部放入检验设备中，但实际工作中如物料很多，全部传入影响操作和气流，可以分多次，一般先检验WFI再检验PW。检验开始前，手部应放入设备内与物料一起自净数分钟。操作进行中，应避免微生物的污染，手部最好不要离开操作区域，不可避免时，应注意对手部及腕部的消毒。检验中动作幅度要小，避免影响气流流向。

应采用薄膜过滤法对WFI及PW进行检验，样品过滤后，应保证滤膜的干燥度。贴滤膜时，应避免产生气泡，而影响微生物的生长。水系统运行稳定时，为了使检验结果更加能反映出水系统的真实情况，样品检验量在满足法规的前提下，可根据样品中微生物负载情况定期评估后确定。

检验过程中应全程持续监测沉降菌，检验结束后要对设备表面和人员双手进行表面微生物监测，浮游菌和悬浮粒子也应定期监测。样品培养时，可不必逐天记录微生物生长数量，但应注意避免个别时出现严重的菌落蔓延情况而导致无法计数。

细菌内毒素检查时注意事项

细菌内毒素工作标准品和鲎试剂在使用前应逐支检查外观，发现安瓶有裂缝，或试剂颜色改变时，不能使用，使用前应保证其温度处于室温。开安瓿瓶时要注意安全问题，必要时可借助工具开启。

溶解鲎试剂及混匀供试品和鲎试剂时，不要剧烈振荡避免产生气泡。
由于凝集反应是不可逆的，所以在反应过程中及观察结果时应注意不要使试管受到振动，以免使凝胶破碎产生假阴性结果。乙醇消毒剂有可导致BET出现假阴性的风险，检验过程中应避免使用。

偏差调查

对测定结果不合格的样品，应及时报告主管，并启动OOS调查，找出根本原因，并制定预防措施，防止再次发生类似情况。所有检项测定完成后，出具检验报告。