众所周知,在实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)中模板的浓度对数值与结果Ct值呈线性关系,Ct值越小,浓度越高。根据所选取定量数学模型的差别,主要有外标定量法(外标法)和内标定量法(内标法)两种定量方法。这些数学模型就像特殊标记的尺子,把得到的Ct值测量为浓度值。
外标法:即绝对定量,是使用一系列稀释的已知浓度标准品与临床标本同时进行测定,求出标准品的Ct值与起始模板浓度之间的线性比例关系。通过待测标本的Ct值就可以在线性关系中求出其原始的模板浓度。
内标法:是指将标准内标与待测样本在同一管内扩增,然后通过内标的量来推导待测模板的量,是一种相对定量的数学模型。该模型是假定了临床样本和内标有一致的扩增效率。[1]
注:“-”没有影响;“+”有一定影响;“++”有较大影响;
小结
内标法和外标法作为两种不同的PCR定量方法模型,有各自的特点,并无本质的优劣势之分。作为一项检测技术,以提供科学、客观、准确的检测结果为目的,为临床医生诊断和治疗提供参考价值,充分体现检测的临床意义才是最重要的。
参考文献:
[1]李金明.《实时荧光PCR》[M].(第2版).科学出版社,2016年:83-93.
注:图片源于网络 侵删
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