Q 内标法需要检测标准品吗？

A 需要。要实现对样本的定量检测，必然需要使用到已知浓度的标准品，就像天平称量离不开砝码一样。内标法就像是用了一个苹果充当砝码，但这个苹果最初肯定得使用砝码称量一遍。

与外标法直接比较待测样本和标准品不一样，内标法使用靶基因Ct值和内标Ct值的差值进行运算。多一个维度的参数，使得该方法更为准确，但也使得运算更为复杂。该差值与靶基因起始模板量之间呈二次函数关系，所以需要测定更多的标准品（6个以上）才能保证这个二次函数的准确性。

因此，内标法不但需要检测标准品，而且还需要检测更多的标准品。

Q 如何不带标准品使用内标法？

A 不带标准品的内标法=调用标准曲线的外标法；由于成本的考虑，使用内标法的厂家大都未使用标准品。所以在检测过程中，这些厂家便采用调取出厂标准曲线函数的方式。部分实验室在使用外标法时也会用到这个方法，但这种方式往往是极不被推荐的。因为如果不能排除不同仪器、不同批试剂、不同实验环境（温度湿度）、不同实验操作等因素造成的影响，那么结果的准确性就很难得到保证。

因而，无论是内标法还是外标法，如希望不带标准品进行检测，应尽量避免上述风险，所以只能选择全封闭系统，并对使用环境做较为严苛的要求。

Q 内标法可以彻底解决样本间差异对定量结果的影响么？

A 不能。不同的标本存在个体化差异，除靶序列的变异外，对PCR定量结果存在影响的还有多种因素。面对不同的干扰因素，两种方法各有优劣。