6月23日，总部位于美国芝加哥的Sparx Therapeutics公司在AACR-2020年会上首次公布了其抗蜜蛋白18剪切变体2（claudin18.2或者CLDN18.2）抗体（Abstract#3361）和CLDN18.2/PD-L1双特异抗体（Abstract# 534）的临床前结果。后者是目前为止全球首个抗CLDN 18.2/PD-L1双特异抗体。该研究由Sparx Therapeutics公司和北京大学肿瘤医院寿成超教授课题组合作开展。

如图1所示，Claudin 18（CLDN18）是一种由CLDN 18基因编码的蛋白质，属于细胞紧密连接蛋白家族（Tight JunctionProteins），可以控制层细胞之间的分子流动。CLDN 18具有两个剪接变体，分别为CLDN 18.1和CLDN 18.2。二者同源性极高、只有八个氨基酸的序列差异。

CLDN 18.2蛋白是一种CD20样分化蛋白，在多种肿瘤组织中高度表达，比如胃癌（60-80%）、胰腺癌（50%）、食管癌（30-50%）和肺癌（40-60%）等，但是在正常组织中几乎没有表达。相反，CLDN 18.1在正常肺的细胞中选择性表达。所以特异性地抑制CLDN 18.2被一致认为是治疗晚期或者转移性胃癌的一个有效途径。

自德国Ganymed公司在ASCO2016年会上公布了其抗CLDN 18.2嵌合抗体zolbetuximab的FAST临床试验结果后，CLDN 18.2作为一个崭新抗癌分子靶点引起业界广泛关注，直接导致当年被安斯泰来以16亿美元收购。胃癌在全球癌症死亡中位列第三、是一种难治性肿瘤，且可选择的靶向药物较少、疗效欠佳。胃癌5年生存率大约只有5％-20％，晚期胃癌患者的中位总生存期（OS）约为10个月。

朱贵东博士在Abstract#3361中报道了Sparx制药公司的抗CLDN 18.2单克隆抗体候选药SPX-101的发现过程和分子特征。他们采用小鼠杂交瘤技术，通过多种免疫方法获得了一系列高活性、高选择性的抗CLDN 18.2鼠源抗体。之后通过序列比对和人源化，获得人源化的抗CLDN 18.2先导抗体。为了进一步优化候选抗体，Sparx公司又通过噬菌体展示筛选技术对先导抗体进行成熟化，全面的药理、药动、以及安全性评价获得其候选抗CLDN 18.2候选抗体SPX-101。头对头实验表明，SPX-101对CLDN 18.2的亲和力比zolbetuximab高100余倍（0.013nM相比1.54 nM，图C），对CLDN 18.1游离蛋白或者细胞表面蛋白的选择性都超过4000倍（图A/B）。I124同位素标记实验表明，SPX-101对胃癌803细胞的摄入和CLDN18.2的表达水平成正相关。除此之外，SPX-101还有结合力对酸、温度不敏感等优点，而且细胞功能性实验、动物肿瘤模型均显示优于安斯泰来同类药物zolbetuximab的活性，展现同类最佳潜力。

上图是SPX-101的一部分动物实验结果。同位素标记实验指出，I124-SPX-101能有效地在稳定表达CLDN 18.2的胃癌组织中富集，但对不表达CLDN 18.2的野生型803胃癌或者同位素标记的免疫球蛋白G则没有观察到相同现象（右）。SPX-101在小鼠和大鼠内的药物动力学特征也比较理想，不仅半衰期比较长、而且抗药抗体（ADA）水平比较低，免疫原性较低预测安全性可能很好（左上）。小鼠接种模型显示，SPX-101在至少两个种肿瘤模型中都表现良好的肿瘤抑制疗效（p=0.0018），并且头对头比较疗效优于安斯泰来的zolbetuximab（左）。

Abstract# 534描述了Sparx制药公司的抗CLDN 18.2/PD-L1双特异抗体候选药SPX-301的设计、筛选和评价过程。CLDN 18.2主要在胃癌表达、而PD-1药物在胃癌的疗效与化疗比优势微弱，所以借助CLDN 18.2对胃癌优异的选择性增加PD-1药物活性和应答人群是个比较理想的开发策略。SPX-301采用了Sparx自主知识产权的SMARTOPTM模式构建，并且利用其LEMMAbTM噬菌体展示技术分段优化。这类新型双抗构建模式除了具有表达量高、无错配、高水溶性、高稳定性等优势外还强调对耐酸性和低解离速率的优化。SPX-301与CLDN 18.2、PD-L1结合力、免疫原性、和聚合性都与单抗类似，但在细胞实验中显示优于单抗的功能活性（下图）。

动物实验结果表明，SPX-301具有和单克隆抗体类似的药物动力学特征（下左），对小鼠的抗药抗体（ADA）水平也很低，所以可能免疫原性较低、安全性良好（下中）。小鼠接种实验表明，SPX-301能有效地抑制稳定表达CLDN 18.2的MC38肿瘤生长，且具有统计学显著（p=0.01）。据报告人朱贵东博士指出，目前Sparx公司已经开始了SPX-301的中试和安全性评价，建立了SPX-301的稳定细胞系，且收率和单克隆抗体相仿。根据公开数据库信息，SPX-301是目前全球首次披露的进入中试阶段的抗CLDN 18.2/PD-L1双特异抗体。

朱贵东博士还透露，为了精准筛选入组患者、提高临床试验的成功率，Sparx公司还开发了针对CLDN 18.2的免疫组化伴随检测试剂盒（CDx）SPX-102。采用该CDx，他们对456个亚裔胃癌样本进行了检测，结果发现43%的胃癌样本呈现CLDN 18.2阳性。对其中的328例胃癌患者组织切片分析显示，SPX-102阳性水平和患者预后呈负相关，所以SPX-102伴随检验试剂盒也有望成为预测胃癌患者预后的一个有效手段。

注：原文有删减