在2019年12月举办的的 HEP DART 会议上，专注于传染病和癌症基因修饰细胞疗法开发的生物科学公司 Enochian Biosciences 发表了一项旗下在研乙肝新药 ENOB-HB-01 的研究（查看文章：值得关注！新方法可诱导已感染HBV肝细胞凋亡而无损正常肝细胞。注：抱歉，由于前面不够仔细，研究中提到的“细胞死亡”应该是“细胞凋亡"）。该体外研究表明 ENOB-HB-01 可使多达97％感染HBV的细胞凋亡，而未被感染的细胞则未观察到明显的凋亡。

在今年5月份召开的美国基因与细胞治疗学会（ASGCT）年会上，公司公布了该药在体内研究的最新研究结果。研究为该药物杀伤受染细胞的作用机理提供了进一步的科学基础，并进一步验证了该方法作为治疗HBV新疗法的潜能。

全世界约有2.57亿的HBV慢性感染者，每年有近100万人因其丧生。现有疗法对慢乙肝作用有限，多数需要终生用药治疗。研究人员探索了多种治疗途径，包括耗尽共价闭合环状（ccc）DNA 库和抑制HBV聚合酶（HBV pol），但进展有限。

在该项研究中，相较于传统通过试图抑制 HBV 生命周期实现阻断HBV复制，研究人员利用病毒和细胞机制来直接杀伤受HBV感染细胞，以此作为潜在的慢乙肝治愈方法。

研究人员将专有的位于 HBV pol / RT 跟特定序列之间的非功能性非编码（nc）RNA载体构建体跟 AAV 颗粒包绕制作成 ENOB-HB-01。ncRNA 将被 HBV pol / RT 识别并保留转录成双链（ds）DNA ，该 DNA 可被编码从而过度表达 caspase-9（casp-9）。

试验分三组，每组有5只HBV转基因小鼠，分别予以注射在EF1a或肝特异性甲状腺素结合球蛋白（TBG）启动子下表达载体的 AAV 颗粒，GFP载体或安慰剂。每周监测外周血中的肝酶和 HBeAg 。在第14或28天收集心脏，肺，肾脏和肝脏标本进行检测。

另外，将表达或不表达 HBV pol 的 HepG2-Red-Fluc 细胞一起植入具有基质胶裸鼠的肝脏，以促进局部肿瘤的生长。在各个时间点，使用IVIS Lumina S5成像系统向小鼠注射D-荧光素底物，以量化肿瘤大小的变化。

在用药处理后第14天，从转基因小鼠中收集的表达HBV的肝和肾细胞器官中显示出显著的casp-9表达，但在不表达HBV的肝和肾细胞中则没有表达。与未处理的和 GFP 对照组相比，用携带TBG启动子的载体处理的小鼠的肾脏组织的casp-9表达没有增加。

此外，在其他器官中对AAV颗粒治疗呈积极反应的细胞未显示casp-9过表达。治疗组中治疗后第28天收集的肝脏显示出弥漫性凋亡的中性粒细胞浸润区，但在对照组中则没有（图2A）。与GFP-AAV和安慰剂对照组相比，治疗组在第4周时，ALT水平增加了1.8-2.2倍，AST水平增加了1.4倍（图2B）。外周血 HBeAg 无明显变化。

综上，研究认为劫持 HIV pol 的新型AAV载体在体内外环境中可特异性诱导Casp-9过表达和HBV表达细胞凋亡。预期外周血中 HBeAg 没有降低，因为在转基因小鼠中再生的肝组织会结构性的表达抗原。尽管还需要其他模型和研究，但数据提示了这是治疗或治愈HBV感染的潜在新途径。（更多肝病新药研究信息敬请关注“肝脏时间”微信公众号）！