作者：阿郎 来自：蒲公英小一班微信群分享

无菌产品的高风险洁净区一旦发生微生物监测超标或是长霉菌，将对无菌产品的无菌保障带来极大的风险。为此，首先需要分析可能导致微生物监测超标的人、机、料、法、环等各环节是否引入污染风险，其次如果能找到确定的污染来源及原因当然是最好的结果，但往往居于微生物污染的不可重现性和随时间推移找到的证据链越来越渺茫，这时就得针对可能引入污染的各种途径采取有效的切断措施，并对可能的人员、区域、水、环境和物体表面加强清洁消毒，以避免造成后续无菌风险没有控制和消除。下面就根据风险分析的鱼骨图工具对人、机、料、法、环存在风险进行头脑风暴，并对风险要素一一分析，分享如下： 

1、人员

2、机器

3、物料

4、方法

5、环境

1、人员“无菌操作 

一是分析人员无菌操作的规范性，可通过回放AB级核心区人员的生产操作视频，如是否动作幅度过大、过快，是否有经常人员手部在瓶子上方跨跃操作，是否干扰动作过多，如加胶塞或加药粉动作不规范等；

二是开RABS门次数较多，是否有炸瓶处理，是否灌装不顺经常开门干预； 

三是人员手动装机是否动作过于复杂、装机时间过长，物料如原辅料、瓶子、胶塞等传送过程中人员处理不规范，是否清洁消毒到位；

四是人员在AB级核心区的设备清洁消毒、墙面地面天花板等清洁是否按规定的SOP程序规范执行，有没有该清洁到的则遗漏了，有没有本应清洁三遍的结果只草草清洁了一遍等。

2、更衣 

回顾人员是否参与无菌操作更衣的更衣确认是合格，直接生产操作人员是否参与过培养基模拟灌装验证，是否进入AB级核心区的部分人员近期有过表面微生物监测超趋势或超限度。检查无菌手套、胡须罩、眼罩、口罩等是有破裂，消毒乙醇是否有异常，无菌服是否灭菌正常，人员在更衣过程是否规范无异常。按规定进入洁净区的人员应对手部进行清洗、干燥和消毒，人员是否均规范做到位。车间管理人员还应加强更衣规范性检查与控制。

3、个人卫生

调查进入AB级核心区人员个人卫生状况，是否勤洗澡、勤洗头发、勤换衣服、勤剪指甲，是否按规定不化妆、不配戴饰物，身体有传染病、伤口或感冒应主动报告并评估是否能允许进入洁净核心区内，人员是否有每年至少一次的健康体检。如果员工住单位宿舍，也可顺便在检查房间卫生时检查是否房间干净整洁，衣物是否勤换洗，是否有霉味。如果个人卫生不注意，有可能带到车间内导致微生物或霉菌污染，特别在南方的梅雨季节，要制订防霉、防潮管理程序并严格执行。

4、培训

应该经常对员工进行微生物、无菌操作规范的培训，人员更衣确认和参加培养基模拟灌装验证要严格要求，新员工进入AB级核心区必须是考核合格的，所有进入洁净核心区的生产、QA、QC、维修等人员均应严格遵守AB级核心区的规范管理制度。人是最大污染源，人员的无菌操作保障意识和实操要不断练习和提高相应水平。培训不能流于形式，不能遗漏或考核放水，无菌产品人命关天，来不得半点马虎。 

二、机器

1、卫生死角 

AB级核心区内有些卫生死角可能导致微生物的污染，应该积极排查。比如，一是有些不能灭菌的部件或物品，如隔离器手套、称重天平、灌装机的部分非金属部件或垫圈垫片、吸胶塞星轮、档板等，还有原料桶外表面和监测用培养碟；二是如灌装机下面的技术夹层的设备部件或机台下表面是否无菌，可取样测无菌；三是回风道、地板、人员鞋底、层流小车密封部件等；四是否有厂房没有密封的小孔、小洞、裂缝，如灯具是否夹层漏水、漏气等。 

2、设备顺应性

有时生产过程中干预动作过大、频次过多会增加微生物的污染风险。如灌装时经常破瓶，倒瓶，卡塞掉塞，设备故障停机，灌装量不稳等，为处理如停机等异常或故障，这会增加人工去干预的机会，如夹子处理倒瓶炸瓶，手套会跨跃到敞口瓶子的上方，又如搞不定故障时还会增加开RABS门的机会等。有些操作动作也会增加风险，如调压塞，刮粉，多次调装量等。这些都应在批记录中进行详细的记录，以便在出现产品污染时可以追溯加以调查分析。 

3、环境监测仪器 

有时离线的粒子计数器也会带来微生物的污染。比如是刚从其它车间转过来的，传递时是否充会外表面消毒，是否清洁干净，仪器是否有伴随微生物污染的其它风险。平时使用完后，是否按程序进行清洁消毒，车间员工是否因为是QC的仪器就偷懒或干碎不去清洁，如不移出会放AB级核心区的哪个位置，是否有引进微生物污染的其它风险。 

4、洗干衣机 

洗衣虽然是清洁衣服的重要环节，但如洗干衣机日常管理不到位，也是有可能引入风险。一是排水阀、过滤网是否定期拆下来清洗，是否是复杂的滚筒或洗干一体机，是否洗衣结束后会开启晾干，是否会有积水在洗衣机底部而滋生微生物，针对此环节可增加用清毒液定期清洗洗衣机等有效措施，如D级和D级以上洁净区洗衣机至少每两月用洗衣机机槽清洁剂清洁一次和使用消毒剂浸泡消毒洗衣机一次，梅雨季节缩短到每月一次。

三、物料 

1、原辅料 

原料、辅料的无菌或微生物限度需要调查分析，是否物料本身带入的。是否会在传递过程中带入风险，如无菌分装药粉的外桶是否清洁消毒到位，所使用消毒液是否除菌过滤。另外，检查药粉桶外、内盖，是否有松动、不密封情况，是否取样后密封完全，会不会在取样环节引入污染风险。

物料可分三个方面进行管理：一是接收物料的管理。接料人员接收物料时，应检查物料是否有长霉菌，或外包装破损应拒绝接收。二是物料使用过程的管理。生产车间使用原辅料前，应先确认环境的温湿度符合洁净室控制要求，方可打开原辅料包装。另外，原辅料的使用过程，要及时扎好原辅料包装袋袋口，防止剩余原辅料吸潮和霉变。退回仓库的原辅料应有双层塑料袋包装。三是存放物料的管理。首先，生产车间存放物料的管理。洁净区应不能存放过多物料，防止造成卫生死角，每工作日应当对存放的物料进行检查，发现物料受潮或霉变，应启动偏差程序，并即时将物料转移出洁净区，使用杀孢子剂溶液对环境进行强化消毒处理，以防污染菌扩散污染其他物料。其次，仓库存放物料的管理。仓管人员应抽查各个库区物料情况，规定定期抽查物料储存状况。梅雨时节应加强巡检，若发现受潮或霉变物料，应启动偏差程序，并即时将物料转移隔离，经QA确认后按照不合格品进行处理。 

2、消毒剂 

调查使用消毒剂的种类，是否每月交替使用不会产生耐药。消毒剂是否在有效期内，可能在过滤或传递环节过程中被污染。过滤的滤芯完整性是否检查，过滤装配过程、过滤过程是否规范。消毒剂的浓度、效力、杀菌范围是否经过验证。消毒剂本身是否存在各种类微生物，是否微生物负荷就很高，微生物、内毒素等安全性指标有在质量标准中做内控规定到位。霉雨季节，需要用杀孢子剂溶液加强消毒，避免霉菌滋生。

3、清洁工具

一般AB级核心区内的清洁工具较为简单，如丝光手巾、不锈钢盘、T字不锈钢架、酒精喷壶等，检查清洁工具是否清洗干净，是否灭菌，拆开是否完整，传递是否规范，喷壶内酒精有无被污染，清洁过程是否严格按SOP操作，丝光手巾沾洗消毒液是否到位，员工在清洁机台、设备、墙、地面、天花板等区域是否规范等。

4、培养碟 

培养碟有沉降菌、浮游菌、表面微生物碟，需要检查使用的培养碟是否在效期内，从QC如何传递到车间的，是否有放置过夜情况，传递过程中是否检查外包装的完整性，无漏气无破裂，放置在缓冲间或传递窗中的温度是否有保证，使用前是否检查有无冷凝水，从外围一级一级传入AB级核心区内，是否按程序脱包，是否按程序进行外表面清洁消毒到位，在洁净区内拆包使用时是否规范，开盖监测是否按规范操作，收碟时也按要求进行。最后分析调查沉降菌、浮游菌、表面微生物监测结果，是否环境、表面等符合相应级别的标准，是否有超标、超警戒限、行动限、超趋势的情况，分析对微生物的污染的要关性。 

5、过滤器 

非终端灭菌的产品，如冻干或水针，往往会有两道0.2цm的过滤器，微生物污染有没有可能两道过滤器漏了，可经过回顾过滤器是否完整性检漏通过了，有没有可能过滤器的滤芯装反了，有没有可能过滤器的离线或在线的高压灭菌出问题了。还有是否可能洗瓶子高温燧道灭菌的空气过滤器不完整，或是冲氮产品的氮气过滤器出问题了，有没有可能冻干机的压缩空气或冲氮过滤器有不同程度的泄露。总之，无菌生产中直接接触产品的过滤器要一一调查分析，不漏过一个隐患。

6、无菌手套 

无菌手套也是主要影响因素之一，一是人员更衣使用的无菌手套，另一个是RABS的手套。首先，更衣无菌手套要对供应商进行审计，追溯无菌手套是怎么生产出来的，国产的无菌手套往往并不是太好用，容易破裂。较好的一些无菌手套来自马来西亚等东南亚国家，但进口来的手套怎么保证无菌性，大多数厂家是拉去钴60照射，但其照射剂量是否经过验证，要追溯到前端的批照射记录。无菌手套入厂后，要按要求取样做无菌检测，也算是多一道保障。另外，无菌手套是否会破裂，使用前要检查包装的完整性，但有些针眼的微漏是很难发现的，所以定期的检漏也是必要的。有些手套会出现不同数量的白点或黑点，会不会导致渗漏，会不会掉下来可见异物颗粒污染产品，这也是要关注的。进AB级核心区的无菌手套应该是一次性的，重复使用不允许的。当然，也会用到一些能湿热灭菌的手套，但其使用时进行操作会有些不太方便，如出现微生物污染，也得调查其灭菌过程是否异常。

其次，RABS的手套也是要检查其无菌性和完整性的，无菌可通过擦试进行，RABS的手套往往伴随车间整体消毒时进行的手套消毒，有些材质好的手套耐湿热灭菌，有些则不耐，要区别处理。要制订定期更换RABS的手套的周期，生产使用完需要切底的清洁消毒，为及时干燥消毒的手套，可用无菌压缩空气吹干或让RABS手套均充分展开自然晾干，不能有没展开的死角没有干透，有水的死角是很容易滋生微生物的，所以也要做这方面的调查。 

7、工衣 

使用工衣是否符合GMP的不脱落纤维等材质标准，是否确定工衣清洗、灭菌次数和更换周期，是否没有破损、渗漏等，进AB级核心区的工衣灭菌是否合格，工衣脉动真空和干燥程度如何，人员工衣进行表面微生物监测的结果，分析调查。梅雨季节，工作服的清洗需使用抗菌洗衣液，AB级是每班次一套不重复利用，C级区、D级区洁净服是否至少每月灭菌一次，如果返潮工衣当天应重新清洗、干燥。

8、注射用水

无菌生产过程中使用到的注射用水，有配液用的物料，有清洗配液罐和冻干机的，还有配制消毒液用的。一是配液用的注射用水要对其使用点定时监测，有些注射用水要需要贮存在罐内进行冷却到工艺的温度要求，如2-8℃或15℃左右，你想从80℃以上的高温降低到这么低的温度，这就需要验证时冷却时间和冷注射用水的贮存有效期，是否会贮存过程中超过过滤前的微生物负荷，这也是要考察的。配液用的注射用水量是否会超过过滤器的载量，导致无菌风险，这也是要验证的。二是清洗配液罐和冻干机的注射用水，进行CIP的用水量是否合适，有没有可能注射用水微生物负荷过高导致无菌风险。三是配制消毒液用的注射用水，也要保证配制、过滤过程中的微生物负荷过高或是过滤后消毒液有无菌污染的风险。这些环节都是要调查取样的，排除注射用水不会污染到产品和环境。

9、公用介质

无菌生产过程中使用到的公用介质主要有压缩空气和氮气，从气体源头开始调查，如使用外购罐还是空压机或制氮机，进到AB级核心区的管道是否有渗漏，使用的除菌过滤器是否在效期内，滤芯完整性是否检测，过滤后管道的无菌性怎么保证，过滤后气体是否根据风险定期监测无菌性，如分装无菌粉针剂时产品需要冲氮使用的过滤器，还有无菌冻干或水针过滤药液用的过滤器，需要每批做滤芯完整性；有些如配液罐或冻干机等辅助过滤器，则定期测定滤芯完整性就可以了。

未完待续！