2013年，美国FDA给其本土一家药企开出了一封警告信。在该警告信中，FDA调查员发现，该公司未检验用于生产非处方药品的水，为此FDA调查员还专门在检查过程中收集了水样，结果从中分离和确认几种微生物，包括一些致病菌。

取样和检验始终是GMP缺陷的沃土。这封警告信中，由于对水的检验问题，导致FDA给出缺陷项。我们一起看看这封警告信：
相对于一般公用系统，水系统的特殊之处是什么？

为什么监管机构认为水的风险很高？

对于水的微生物检验，有什么需要特别关注之处？

水，警告信
违规条款

Your firm failed to withhold each lot of components, drug product containers and closures from use until the lot has been sampled, tested or examined as appropriate and released for use by the quality control unit (21 C.F.R 211.84(d)(2)).

你们的公司未能阻止每批组件、药品容器和密封件的使用，直到质量控制单元对其进行适当的取样、检验或检查并放行使用为止（21 CFR 211.84（d）（2）） ）。

水的检验问题

For example, you have not tested the water used in the manufacture of your Over-the-Counter (OTC) drug products to ensure the absence of objectionable microorganisms since 2006. Several microorganisms including Pseudomonas aeruginosa, Cronobacter sakazakii, Burkholderia pseudomallei and Acinetobacter ursingii were isolated and identified from the water samples that our investigators collected during the inspection.

例如，自2006年以来，对于用于生产非处方（OTC）药品的水，你们尚未检验，以确保不存在不良微生物。我们的调查员在检查过程中收集了水样，从中分离和确认几种微生物，包括铜绿假单胞菌、阪崎杆菌、克氏假单胞菌和乌氏不动杆菌。

In your response you state your firm will increase water sampling to (b)(4) times per year and explore the use of specialized media. Your response is inadequate because your firm uses deionized water to manufacture drug products intended for human use. Water utilized in the production of finished human drug products must, at a minimum, meet the Purified Water, USP, monograph as well as appropriate limits for microbial count. In addition, your firm continues to fail to monitor water quality routinely as you only commit to collecting (b)(4) samples per year. Your response also does not include an investigation into the root cause of the unsatisfactory microbial control of your water system.

在你们的答复中，你们声明你们的公司将把水取样次数增加到每年XX次，并探索使用专门的培养基。你们的答复不充分，因为你们的公司使用去离子水来生产供人使用的药品。用于生产最终人类药品的水必须至少满足USP纯化水专论以及微生物计数的适当限度。此外，由于你们仅声称每年收集XX个样品，因此你们的公司仍然无法日常监控水质。你们的答复也没有包括：对你们的水系统微生物控制失效的根本原因进行调查。

It is essential that your firm’s topical products be produced in a manner that is appropriate in View of their intended uses. We note that some of your firm’s products are used in either a hospital or nursing home setting, or applied on broken skin. It is critical that your firm considers the intended uses of your products when determining manufacturing and testing standards. These products should be consistently manufactured to minimize bioburden and be free of objectionable microorganisms.

根据你们公司的预期用途，以适当的方式生产局部产品至关重要。我们注意到，你们公司的某些产品在医院或疗养院中使用，或在破损的皮肤上使用。在确定生产和检验标准时，贵公司必须考虑产品的预期用途至关重要。这些产品应始终如一地生产以最大程度地减少生物负荷，并且不含有害微生物。

水，特殊之处

取样和检验始终是GMP缺陷的沃土。
而水系统的特殊之处在于：其产生的水可以被视为原材料，因此要符合GMP对物料的要求。

在生产工厂中存在的所有现场公用系统中，水系统对最终产品的影响最大，因为存在潜在的动态变化，有时甚至是难以控制的质量波动，因此需要严密监测以确保可接受性。

在水系统中，随着水的不断产生和分配，采用传统方法通过离散的批号识别这些物料，检验批次并放行以生产的传统方法是不可行的。在获得所有检验结果之前，通常已经使用了连续产生的水。因此监管机构会认为：相对于一般物料，它们对产品质量以及随后对患者安全的风险要高得多。

水，培养条件

在行业中，用于水样品的微生物检测方法都存在争议。
争议主要焦点之一，是培养温度和持续时间。

在实验室进行微生物检测的趋势是：使用标准的培养箱温度范围和持续时间。这可能适用于检验除水以外的成品和原材料，但不适用于水检验。大多数产品和原材料都会受到环境微生物的外源污染而产生生物负荷。因此，这些环境污染物通常根据常见的培养温度最佳值和培养持续时间，可以大致分为几类。

培养温度

不建议使用这些标准方法检验水。水中的生物负荷通常就地生长，而不是最近的外来环境污染的结果。在水系统中的环境条件下，自然地会选择在该水系统温度下更适宜并生长得最好的微生物。这并不是说这些微生物不能在这些条件之外的温度下生长，但是这种耐受性是有限度的。例如，对于通常在25°C至35°C的温度范围内运行的水系统，将微生物检验样品在30°C至35°C的温度下培养，通常会使这些水系中的大多数菌群得以生长。

如果水系统始终保持在15°C–25°C，则在30°C–35°C培养时，适合在这些温度下生长的微生物可能不会全部产生菌落。25°C–30°C培养对于最大程度的恢复可能更为理想。对于通常在更低温度下运行的水系统，培养温度可能需要为20°C–25°C或更低。30°C–35°C的培养温度几乎可以肯定会抑制这种冷水系统的某些菌群（即使不是全部）的生长，因此该药典水质检验的标准培养温度范围不适用于检验冷水系统中的水样。

如果使用次优的培养温度，则微生物计数可能偏低，从而误导水系统操作员和用户以为该系统处于微生物控制之下。在这种情况下，应对最高回收率的培养温度进行评估。

培养时间

培养的持续时间还必须适合水系统中的菌群以及培养温度。一些水系统只有快速生长的细菌在其中定殖，而其它系统则可能有快速和慢速生长的混合物。不要盲目地使用标准化的培养时间，应凭经验确定一个允许菌落数稳定或稳定的时期，避免错过其它生长缓慢的菌落。

较高的培养温度往往会比较冷的温度产生更快的菌落。但是，如果超出部分微生物种群的最高生长温度，那么较高的培养温度将比较冷的温度产生更低的微生物数量。

一般来说，培养温度越低，菌落生长所需的时间就越长。理想情况下，应确定在最短时间内，产生最大微生物多样性和最高微生物数量的条件。没有这种确定研究，微生物计数可能偏低。

检验温度和持续时间的不适当选择，可能会低估真正的微生物计数。因此，监管部门期望对用于计数水系统菌群的检验方法进行优化，并提供论证，以供审查。

Ref:
[1] FDA WARNING LETTER. Ameriderm Laboratories, Ltd. 2 December 2013.
[2] ISPE Good Practice Guide: Critical Utilities GMP Compliance – How to Be Compliant and Ready to Prove It. ISPE, 2020.